Морфологическая диагностика. Подготовка материала для гистологического исследования и электронной микроскопии. Коллектив авторов

тонких срезов образцов исследуемых тканей возможно только после пропитывания последних достаточно плотными средами, какими являются парафин и целлоидин. В настоящее время целлоидин применяется очень редко.

      Парафин – смесь высокомолекулярных предельных углеводородов, получаемая при перегонке нефти. Сорта парафина, используемые в качестве среды для гистологической заливки, имеют температуру плавления от 48 до 60 °C. Наиболее удобен в повседневной работе парафин с температурой плавления 52 – 56 °C. Без дополнительной подготовки технический, пищевой и медицинский парафины не позволяют производить заливку, обеспечивающую высокое качество срезов. В гистологической лаборатории желательно использовать очищенные сорта парафина с добавлением восков или специально разработанные на основе парафина среды с модифицирующими добавками, такие как гистомикс («БиоВитрум», Россия), Paraplast (Sigma, США), Histoplast (Shandon, США).

      Пропитку парафином проводят в термостате, обеспечивающем поддержание температуры на 1 – 2 °C выше температуры плавления используемого парафина (обычно устанавливают температуру 58 °C).

      Поскольку расплавленный парафин и этанол не смешиваются, из обезвоженного материала следует удалить спирт (или метилсалицилат, если он был использован для длительного хранения объектов) при помощи промежуточной среды – растворителя парафина, смешивающегося с этанолом. В качестве промежуточной среды можно использовать хлороформ, авиационный бензин (рекомендован Р. Лилли, 1969), петролейный эфир, ксилол, бензол, толуол, октан, гексан и др. В практической работе наиболее часто применяют хлороформ и ксилол. Неудовлетворительное качество заливки при использовании хлороформа может быть обусловлено применением хлороформа «для спектроскопии», в который добавлен этанол, разливного хлороформа (при использовании недостаточно просушенных после промывки емкостей) и реактива, долго хранившегося на свету. При доступности абсолютного этанола следует предпочесть менее токсичный петролейный эфир, который лучше удаляет этанол и позволяет достичь более высокого качества пропитки парафином.

      Можно рекомендовать следующие схемы ручной проводки и пропитывания материала.

      Заливка в парафин с использованием хлороформа. Обезвоженные объекты помещают последовательно в следующие среды:

      – смесь абсолютного этанола с хлороформом 1: 1 – 1 – 2 ч;

      – хлороформ (I) – 1 ч;

      – хлороформ (II) – 1 ч;

      – хлороформ (III) – 1 ч;

      – хлороформ – парафин (1: 1) в термостате при 37 °C – 12 – 24 ч;

      – парафин (I) в термостате при 56 – 58 °C – 40 – 60 мин;

      – парафин (II) в термостате при 56 – 58 °C – 40 – 60 мин;

      – парафин (III) в термостате при 56 – 58 °C – 40 – 60 мин.

      При отсутствии возможности использовать абсолютный этанол первый этап проводки можно пропустить, однако качество пропитки парафином может быть несколько хуже. После обезвоживания с использованием метилсалицилата (или метилбензоата) этот этап следует пропустить. Качество заливки при этом не ухудшится.

      Заливка в парафин с использованием петролейного