Антибиотики и химиотерапевтические препараты. И. Ф. Каримов

буфером при рН 7,8-8,0.

      Пример расчета приведен в таблице 6.

      Таблица 6 – Определение концентрации стрептомицина методом последовательных разведений

      В данном случае (таблице 6) 10 мкг/мл стрептомицина подавляют развитие тест-культуры в наибольшем разведении, соответствующем 5-й пробирке. Следовательно, 5 мкг/мл вызвали бы подавление роста микроба только в 4-й пробирке, но не в 5-й, а 20 мкг/мл задержат рост в 6-й пробирке, 40 мкг/мл – в 7-й; 80 мкг/мл – в 8-й; 160 мкг/мл – в 9-й; 320 мкг/мл – в 10-й пробирке и т.д.

      Сравнивая эти величины, устанавливают, что испытуемый раствор, задерживающий развитие тест-организма в 10-й пробирке (разведение 1:1024), содержит 320 мкг/мл стрептомицина.

      Расчет антибиотической активности испытуемого раствора при работе по методу последовательных разведений при наличии стандарта можно производить по следующей формуле

Х = Ри / Рс × С, (2)

      где Ри – максимальная степень разведения испытуемого раствора, при которой отсутствует рост тест-организма;

      Рс – максимальная степень разведения стандартного раствора, обеспечивающая отсутствие роста тест-микроба;

      С – исходная концентрация стандартного раствора антибиотика;

      Х – искомая концентрация антибиотика в исследуемом растворе.

      В нашем примере Ри=1024, Рс=32, С=10 мкг/мл; искомая концентрации антибиотика

      X = 1024: 32 × 10 = 320 мкг/мл.

      Метод последовательных разведений может дать сопоставимые результаты лишь при соблюдении определенных условий, а именно:

      1) тщательная стерильность проведения анализов;

      2) использование постоянных сред для разведения одного итого же антибиотика;

      3) внесение определенного количества клеток или спор тест-организма;

      4) определенная длительность инкубации пробирок, засеянных тесткультурой;

      Иногда под действием испытуемого антибиотика возникают устойчивые к нему формы тест-микроба. Появление даже единичных резистентных клеток, которые могут дать затем развитие, приведет к ошибочным результатам при определении биологической активности препарата.

      Чтобы избежать подобного явления для разведений используют не бульон, а агаризованные среды, разлитые в пробирки. После проведения процесса разведения пробирки размещают в наклонном положении, с тем, чтобы получить косячки застывшего агара. На поверхность скошенного агара микробиологической петлей высевают суспензию тест-микроба. После этого пробирки помещают в термостат на 24 ч при температуре, оптимальной для развития тесторганизма. Расчет активности ведут тем же способом, что и при разведении антибиотика (культуральной жидкости) в жидкой среде. Появление одиночных колоний, образовавшихся из резистентных форм, в расчет не принимается.

      Определение антибиотической активности методом серийных разведений можно производить и на чашках Петри. В пробирки, содержащие по 9 мл расплавленного питательного агара, вносят по 1 мл определенного разведения изучаемого